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「产品上新」AKITA高通量器官芯片
发布时间:2024/03/20 点击数:560


01  关于AKITA

总部设在芬兰,奥卢的器官芯片制造商AKITA,by Finnfadvance,成立于2019年。


搭载高通量器官芯片板,可被设计成单器官和多器官,兼容多种成像模式,高人体相关性的下一代人体体外模型,加速药物开发,降低临床前试验失败的风险,也可用于个性化医疗。


上海曼博生物医药科技有限公司是AKITA,by Finnfadvance官方授权的中国经销商。


02  AKITA Plate

AKITA Plate,超.高通量的器官芯片板(图1),可设计成单器官和多器官(图2),旨在提供微生理学培养条件,以生成和维持生物屏障(图3),包括血脑屏障、气道屏障、肠道上皮屏障和血管内皮屏障等。


图1:AKITA Plate的两种尺寸

(96孔板 & 384孔板)


1)96孔格式:允许进行更高体积 (150uL) 的实验,每板可进行24个重复;2)384孔格式:允许进行更高通量,96个实验,但体积较小 (30uL)。


图2:AKITA多器官连接


2-6个连接和血管化组织,每块96孔板10-24次多器官测试,图中以肠-神经双器官为例。




图3:类似体内条件,内皮细胞在持续的流动条件下维持,上皮细胞则以静态方式维持,可是浸没状态或气液界面状态下,中间腔室也可放与培养的类器官甚至肿瘤组织。


AKITA Plate允许高分辨率和高内涵成像(图4),属于用户友好型器官芯片平台,兼容几乎所.有成像模式:数字全息术、超声成像、电子显微镜、共焦成像,包括MRI,具有SBS标准。


图4:AKITA Plate 高分辨率成像


03  AKITA Lid

AKITA Lid是一款以客户便捷性为前提考虑因素的4电极TEER仪器。完全无线控制和监控使得数据收集和远程监测一步到位。


多个Lid可以同步使用,提供大型实验的概览,使其成为真正的高通量筛选和高内涵筛选(HTS和HCS)准备系统。


与AKITA Lid兼容,各样本几秒钟内同时完成跨膜电阻(TEER )的测量,并支持连续长期测量(图5)。


图5:AKITA Lid


AKITALid是专为AKITA Plate设计的多通道TEER(经上皮电阻)测量装置。电学读数速度快,可根据需要进行重复测量。


TEER(经上皮电阻)值测量,是快速和可重复分析评估生物屏障完整性所需的更可靠的非光学测量技术。


04  AKITA Rocker

无泵流体操作平台,平稳的摇摆动作可通过AKITA Plate的微通道进行连续培养基灌流。


摇摆角度和摇摆速率均可控,允许用户设置特定于模型的条件,适用于任.何标准的细胞培养箱,无论气体、湿度和温度要求如何。



图6:AKITARocker


AKITARocker经过优化且兼容原装芯片的设备完成类器官芯片研究设置,同时运行4块AKITA Plate,用户可通过软件远程操控。


05  结语

作为一种更快、更精确、可重复的药物研究和开发系统,对于靶向人体特定受体或免疫系统的治疗手段效果更好,如CAR-T细胞治疗或者基因治疗,可桥接传统的体外2D模型和体内模型间的鸿沟。目前AKITA已被AstraZeneca等知.名药企充.分验证,应用范围广.泛(图7)。


图7:AKITA的应用领域及成熟器官模型速览


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当前位置:首页 >新闻中心>技术专栏>InSphero 3D微球培养板助力实体瘤细胞微球与免疫细胞共培养
InSphero 3D微球培养板助力实体瘤细胞微球与免疫细胞共培养
发布时间:2023/01/13 点击数:982

近年来,CAR-T/NK细胞免疫疗法在实体瘤治疗研究领域中非常火热。随着细胞免疫治疗的兴起也推动了实体瘤研究的发展,但是由于人源化体系的复杂性、免疫系统的部分或无效重组建等问题,致使免疫肿瘤模型面临着巨大的挑战,临床上迫切需要能够用于个体化验证疗效的体外模型。细胞微球为细胞免疫治疗在实体瘤中的研究提供了新的契机。然而,现有的细胞微球培养方法中有许多限制因素阻碍了肿瘤细胞微球与免疫细胞充分接触。


InSphero 3D微球培养板为获得大小均一的肿瘤细胞微球提供了新的解决方案,同时为细胞微球与免疫细胞共培养提供一种新的选择。本文中小编将为大家分享一篇肿瘤细胞微球与免疫细胞共培养的解决方案。


肺肿瘤细胞微球与PBMC细胞免疫共培养解决方案


01- 试剂耗材

• 冻存的A549–GFP/hDF细胞

• 适宜的细胞培养基

• T75细胞培养瓶(Greiner,658175)

• InSphero Akura 96/384 Spheroid Microplate

• 无菌PBS缓冲液(无钙镁离子)

• 胰酶

• 70%乙醇

• 血球计数板

• 水浴锅(设置在37℃)

• 血清移液管(5ml和10ml)

• 离心机

• 一级生物安全柜

• 二氧化碳培养箱(设置在5% CO2浓度和37℃)

• 倒置显微镜

• 15ml无菌离心管

• 多通道移液器、适配的无菌吸头、无菌试剂槽


02- 细胞扩增

注意:所有实验步骤遵照无菌操作规范在生物安全柜中操作。

1、确保所有细胞培养基标记清晰并在正确的条件下存放。

2、将培养基预热至37℃。

3、向T75中加入5ml预热的培养基。

4、在水浴锅中快速融化细胞。

5、使用血清移液管吸取5ml预热的培养基,并于融化的细胞混合,将混匀液转移至15ml离心管中。

6、室温下离心,200 RCF 2min,弃去上清液,并用5ml预热培养基重悬细胞。

7、将细胞转移至T75中。

8、将T75转移至二氧化碳培养箱中。

9、培养24h后,更换培养基,并在显微镜下检查细胞贴附情况。

10、当细胞达到70-80%交汇度时(约48h)可以用于下游的细胞微球培养。


03- 细胞悬液制备

1. 将培养基预热至37℃。

2. 将T75从二氧化碳培养箱中取出,使用血清移液管弃去培养基。

3. 向T75中加入10ml的PBS。

4. 轻轻摇晃培养瓶后弃去PBS。

5. 加入1ml的胰酶(1x),于37℃孵育5min。

6. 加入9ml的完全培养基(含FBS)终止消化。

7. 将细胞液转移至15ml离心管。

8. 室温下离心,200 RCF 2min,弃去上清液,并用适量(取决于细胞压积)预热培养基重悬细胞。

9. 使用血球计数器(或其他细胞技术方法)进行计数。

10. 调整细胞密度至12500cells/ml(即500 cells/40μl)。


04- 细胞微球构建及培养(图1)

图1 Akura 96孔微球培养板的使用流程


1、使用70%乙醇擦拭Akura培养板的外包装,并在生物安全柜中取出Akura培养板。

2、将单细胞悬液转移至试剂槽中,使用移液器轻轻吹打细胞悬液以保证浓度均一。

3、使用多通道移液器或自动化工作站将细胞种植至Akura培养板,每孔70μl。

4、盖上板盖,室温下离心,250 RCF 2min。

5、将培养板转移至湿润的二氧化碳培养箱中,并保持斜立(与水平面夹角30度,图1)。此过程可以使用InSphero专门设计的Akura斜立支架(图2,InSphero,CS-10-002-00)或将培养板的一侧垫高。


图2 Akura斜立支架(InSphero,CS-10-002-00)


05- 细胞微球与PBMC共培养

1. 用初始直径约为250µm的A549-GFP/hDF细胞微球与免疫细胞进行共培养。

2. PBMC细胞按照制造商说明书进行复苏;

3. PBMC用anti-CD3(5ng/ml)和anti-CD28(250ng/ml)预处理24h;或不做处理(T-cell-naïve)。

4. 抗体预孵育的PBMC使用A549–GFP/hDF完全培养基洗涤3次;

5. PBMC在A549–GFP/hDF完全培养基中稳定培养24h;

6. PBMC用10 µg/mL的CellTracker Deep Red dye(cat. no. C34565)在37℃条件下染色1h;

7. A549–GFP/hDF细胞微球与PBMC在insphero 384微球培养板中共培养(10:1 E:T rate);

8. 使用3D活细胞成像设置监测肿瘤微组织内的免疫细胞的浸润39小时。


06- 结果

肺癌细胞肿瘤微球与免疫细胞共培养的活细胞成像结果如图3所示,其中红色为免疫细胞;绿色为A549-GFP/hDF细胞;该研究中对No PBMCs、naïve PBMCs、Activated PBMCs三个实验组分别选取0、4h和37h三个时间点进行分析。结果表明Activated PBMCs在37h时可以有效杀死A549肿瘤微球中的细胞。

图3 3D肺癌模型中免疫细胞浸润的活细胞成像

07- 结论

InSphero微球培养板是为3D细胞模型的常规生成和长期培养而设计的。超低吸附材质制备的孔底可以确保细胞微球在生长过程中不会粘附在板底部。Insphero微球培养板在进行细胞微球培养时,通过在每个孔中接种相同数量的肿瘤细胞,可以为免疫细胞共培养提供良好一致性的细胞微球。此外,Insphero微球培养板特殊的孔结构为细胞微球和免疫细胞提供了更加拥挤的微环境,使免疫细胞与肿瘤细胞充分接触以达到较好的杀伤效果。

参考文献

[1] Wardwell-Swanson J,Suzuki M,Dowell K G,et al. A Framework for Optimizing High-Content Imaging of 3D Models for Drug Discovery:[J]. SLAS Discovery,2020,25(7):709-722.



蛋白试用

蛋白试用

培养基试用

培养基试用